基因治療是將外源功能基因導入人體目標細胞，以糾正或補償基因缺陷和異常所導致的疾病，達到治療目的的新型療法。根據其治療途徑的不同，基因治療可分為體內治療和體外治療。與基因治療不同的是，細胞治療則是利用患者自身或供體的活細胞，經體外改造後回輸患者體內，替換受損細胞、病變細胞或刺激人體免疫反應和再生，從而達到治療疾病的目的[1]。
目前，基因細胞治療有望從病源直接上治癒腫瘤、遺傳病和感染性疾病等常規療法不能解決的疾病。得益於生物技術的進步和相關政策的前進，基因細胞治療技術正在迅速發展，同時也面臨諸多挑戰。如相關產品需進行，無菌檢測、支原體檢測、內毒素檢測、細胞存活率、總細胞數量、病毒載體濃度/純度、有效細胞比率、CAR轉導/轉染效率、CAR基因拷貝數、複製型病毒殘留等質控指標必須通過嚴格測試，以保證相關產品的安全和有效性。
基因治療質控流程
對於整個基因細胞治療的研發和生產過程，品質控制十分的重要，，如何確保和提高品質控制的精准性是基因細胞治療的成功研發和順利生產的關鍵。與傳統螢光定量PCR技術相比，數位PCR作為一種可精准進行核酸分子絕對定量的新技術，已被廣泛應用於載體構建、細胞轉染/病毒包裝、污染監測和生物分佈等完整的質控過程，為基因細胞治療相關產品的成功研發和安全生產保駕護航[3]。
自動化的品質監控檢測是提高基因細胞治療產品安全性和品質可控性的重要途徑之一。品質監控檢測的自動化不僅可以減少不同批次產品間的差異變化和交叉污染，還可降低時間成本。QIAcuity為奈米微孔板的數位PCR系統，將微反應體系製備、PCR擴增和資料分析集成到全自動儀器中，整個流程只需一步手工操作即可在2小時內快速獲得實驗結果。在提升檢測速度和操作簡便性的同時，也最大程度減少由於人工作業不當等外界因素引入而導致的實驗誤差。
對於整個基因細胞治療的研發和生產過程，品質控制十分的重要如何確保和提高品質控制的精准性是基因細胞治療的成功研發和順利生產的關鍵。與傳統螢光定量PCR技術相比，數位PCR作為一種可精准進行核酸分子絕對定量的新技術，已被廣泛應用於載體構建、細胞轉染/病毒包裝、污染監測和生物分佈等完整的質控過程，為基因細胞治療相關產品的成功研發和安全生產保駕護航[3]。
自動化的品質監控檢測是提高基因細胞治療產品安全性和品質可控性的重要途徑之一。品質監控檢測的自動化不僅可以減少不同批次產品間的差異變化和交叉污染，還可降低時間成本。QIAcuity為奈米微孔板的數位PCR系統，將微反應體系製備、PCR擴增和資料分析集成到全自動儀器中，整個流程只需一步手工操作即可在2小時內快速獲得實驗結果。在提升檢測速度和操作簡便性的同時，也最大程度減少由於人工作業不當等外界因素引入而導致的實驗誤差。
- Pipette reaction mixtures to dPCR plate
- Instrument automatically partitions,thermal cycles, and reads plate
- Analyze results
如何確保和提高基因細胞治療的安全性、有效性和一致性是開發基因細胞治療產品極待解決的問題。QIAcuity dPCR系統作為一種全自動化的基因細胞治療產品品質監控工具，結合經優化設計的高度特異和靈敏dPCR Assays，可精准進行病毒載體的拷貝數（95%的置信區間，CV＜10%）、病原體和殘留宿主細胞等污染物的微拷貝數檢驗以及提高再現性，進而提高基因細胞治療產品的安全性和有效性[4]。
在基因細胞治療的整個品質管控流程，QIAGEN可進行CD3、CD28和ICOS等外源目的基因、AAV病毒滴度、殘留宿主細胞、總細胞量、支原體和大腸桿菌的檢測，所有Assays均經過嚴格的Wet-lab 驗證，確保其檢測特異性和靈敏度。
細胞治療應用
基因治療應用
1. B Furuta-Hanawa,T Yamaguchi,et al.Two-Dimensional Droplet Digital PCR as a Tool for Titration and Integrity Evaluation of Recombinant Adeno-Associated Viral Vectors[J]. Human gene therapy methods,2019,30(4):
2. X Dai,Y Mei,et al.Standardizing CAR-T therapy: Getting it scaled up[J]. Biotechnology advances,2019,37(1):
3.. Lu Alex,Liu Hui,et al. Application of droplet digital PCR for the detection of vector copy number in clinical CAR/TCR T cell products[J]. Journal of translational medicine,2020,18(1):
