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隨著NGS技術發展-磁珠純化的缺點你注意到了嗎?

高通量定序技術(NGS)日趨成熟應用廣泛,文庫製備過程中的磁珠純化步驟也習以為常,但磁珠純化本身的技術缺陷以及對資料帶來的影響你是否考慮過呢?

純化造成的損失將無法挽回

眾所周知磁珠純化會導致樣本的損失,磁珠回收效率可用來評估磁珠的回收能力,而回收率根據磁珠濃度和磁珠品牌會存在差異,最常用的磁珠純化濃度在0.8-1.0×之間,核酸回收率在70-80%左右。對於起始樣本充足的情況,這些損失對資料的影響有限。但是如果起始樣本量有限,或是樣本中目標突變或轉錄本拷貝數較低,多輪磁珠純化中核酸損失反復累加,就可能從根本上導致目標突變或轉錄本的丟失,降低NGS靈敏度,影響檢測結果[1]。為了應對這一技術缺陷,磁珠NGS技術發展多年,磁珠純化的缺點你注意到了嗎?

告別磁珠純化酵素法純化引領靶向建庫新時代

QIAGEN全新推出的QIAseq Targeted DNA Pro靶向定序方案,改良了接頭連接、文庫擴增產物純化方式,採用酵素法純化一步加樣操作輕鬆去除未反應的接頭與引物,不需要任何額外操作無縫銜接後續實驗步驟,與繁瑣的磁珠純化說再見,極大的節省了操作時間。配合升級後的擴增體系,整體實驗時間僅需5.5 h,同時相容Illumina與Ion Torrent定序平臺。

磁珠純化不僅是操作繁瑣,每輪純化都會造成不可逆的文庫損失,其結果就是定序數據中unique reads的數量隨之減少,最終降低檢測的靈敏度與準確性。而酵素法純化則輕鬆避免了純化過程中的損失,更有效的利用所有起始範本DNA,更真實的還原樣本攜帶的基因資訊。

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